今天我们继续来聊一聊ImageJ的高阶使用技巧。

问题三、为什么总是全部圈起来的灰度值，有没有大神指导呢求助！

本问题涉及免疫印迹(Western Blot)分析，提问者不能分别得到每个条带的值。

灰度值0为纯黑，255为纯白，灰度值与光密度值(OD值)的关系如下图所示：

以灰度来统计WB条带的话，无条带的纯白255左右，条带越黑着色越深灰度值反而越小，这与我们的认知不符。

步骤：

1. File -> Open -> 打开需要分析的WB条带。

2. Image –> Type -> 8-bit, 将图像转换为8-bit的灰度图片；Image-> Invert，黑白反转，得到如下图片：

3. Analyze -> Calibrate, 校正光密度值Function中选择Uncalibrated OD，左下方Global calibration，勾选表示有多张图片打开时对所有图片进行此操作。否则只对当前图片进行此操作。

4. 在工具栏中选择矩形工具——Rectangular, 最左边的为矩形工具，选择条带：